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什么是ATCC細(xì)胞？如何使用它？
發(fā)布時(shí)間： 2022-10-22 點(diǎn)擊次數(shù)： 2440次ATCC細(xì)胞的原理在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過(guò)細(xì)胞最易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，活力受損不大。目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞。ATCC細(xì)胞的使用方法：1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或隔夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。然后，用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，收集瓶?jī)?nèi)液體于50ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用6ml*培養(yǎng)基重懸，全部接種到25cm2培養(yǎng)瓶中，再放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細(xì)胞量很多，可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。2、細(xì)胞傳代：細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí)，收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離5min，棄上清，用12ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按1:2的比例進(jìn)行接種傳代，接種到25cm2培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3天更換培養(yǎng)液。換液的步驟同細(xì)胞NK-92細(xì)胞，ATCC細(xì)胞，培養(yǎng)技術(shù)傳代步驟。3、細(xì)胞凍存：a、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí)，收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=5:4:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中。b、先將細(xì)胞凍存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后將其移入-80℃隔夜，24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。4、細(xì)胞復(fù)蘇：a、從液氮中取出細(xì)胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。b、將凍存管中的細(xì)胞移至含有5ml*培養(yǎng)液的15ml離心管中，然后1000rpm/min，離心5min。c、棄上清，沉淀細(xì)胞用6ml*培養(yǎng)基重懸，接種到培養(yǎng)瓶中，zui后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。d、第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。